Разделение продуктов амплификации методом горизонтального электрофореза.
. Залить в аппарат для электрофореза ТАЕ буфер, приготовленный на дистиллированной воде разбавлением 50хТАЕ в 50 раз.
. К 2,0 г агарозы добавить 2 мл 50х ТАЕ буфера и 100 мл дистиллированной воды.
. Приготовленную смесь расплавить на электрической плите или в СВЧ-печи. Добавить к 100 мл расплавленной агарозы 10 мкл 1% раствора бромистого этидия. Перемешать.
. Охладить расплавленную агарозу до температуры 50-60оС и залить в планшет для заливки геля. Для получения в агарозном геле карманов для нанесения образцов установить на планшет гребенку, используя зажим типа «бульдог». После застывания агарозы осторожно вынуть гребенку из геля и перенести планшет с гелем в камеру для проведения электрофореза.
. Нанести в карманы геля по 10-15 мкл амплификата в последовательности соответствующей нумерации проб. Нанести положительные и отрицательные контроли.
. Подключить электрофоретическую камеру к источнику питания и задать напряжение, соответствующее напряженности электрического поля 10-15 В/См геля. Провести электрофоретическое разделение продуктов амплификации в направлении от катода (-) к аноду (+). Контроль за электрофоретическим разделением осуществляется визуально по движению полосы красителя. Полоса красителя должна пройти от старта 1,5-2см.
Визуализация результатов электрофореза
. Вынуть гель из формы и перенести его на стекло УФ-трансиллюминатора.
ВНИМАНИЕ! С гелем агарозы следует работать в перчатках. Бромистый этидий является сильным мутагеном.
. Включить трансиллюминатор и проанализировать результаты анализа. Фрагменты анализируемой ДНК проявляются в виде светящихся оранжево-красных полос при облучении УФ-излучением с длиной волны 310 нм.
Смотрите также
Общие принципы диагностики и оказания неотложной медицинской помощи больным с заболеваниями острого живота на догоспитальном этапе
Термином "острый живот" обозначают клинический
симптомокомплекс, развивающийся при повреждениях и острых заболеваниях брюшной
полости, при которых требуется или может потребоваться ...
Осложнения инсулинотерапии
1. Хроническая
недостаточность эндогенного инсулина с сохранением умеренной гипергликемии
вызывает задержку роста, полового развития, гепатомегалию, ранние сосудистые
осложнения (синдром Мориа ...
Этиология, патогенез, клиническая картина, диагностика и дифференциальная
диагностика, принципы лечения
Впервые
сахарный диабет (СД) описан в древней Индии более 2000 лет назад.
СД
- синдром хронической гипергликемии, развивающийся вследствие абсолютной (I
тип) или относительной (II
тип) нед ...