Медицина и здравоохранение сегодня

Методы определения качественного и количественного состава основных групп биологически активных веществ, содержащихся в пряно-ароматических растениях

Учебные материалы / Пряно-ароматические растения / Методы определения качественного и количественного состава основных групп биологически активных веществ, содержащихся в пряно-ароматических растениях

В качестве сырья используют образцы надземной части пряно-ароматических растений, собранных в фазу цветения и высушенных до воздушно-сухого состояния. Числовые показатели качества пряно-ароматических растений определяют в аналитических пробах исследуемых объектов, изготовленных в лабораторных условиях в трех повторностях. Образцы хранят в сухом, чистом, хорошо вентилируемом помещении, без прямого попадания солнечных лучей. Для всех образцов определяют показатель влажности сырья, который учитывают при расчетах количественного содержания действующих веществ.

Определение содержания эфирного масла в образцах сырья проводят по методу Гинзберга, путем перегонки с водяным паром, измерения объема и расчета процентного содержания по отношению к аналитической пробе. Кроме того, в некоторых случаях только перегонка с водяным паром позволяет получить эфирные масла определенного качества, например, содержащие азулены (ромашка, тысячелистник).

Определение флавоноидов проводят методами качественного и количественного анализа. Для этого готовят извлечения из образцов сырья (1:10) с использованием 96%-ного этанола после предварительной форэкстракции гексаном в аппарате Сокслета. С полученной очищенной суммой фенольных соединений проводят качественные реакции, хроматографический анализ на бумаге и в тонком слое сорбента, с использованием различных систем растворителей, хромогенных реактивов. В связи с тем, что флавоноиды обладают значительной интенсивностью поглощения в УФ-области спектра с наличием максимумов, относящихся к первой (320-380) и второй (20-270) полосе поглощения, их количественное определение проводят наиболее точным и чувствительным методом - спектрофотометрическим, позволяющим определить сумму флавоноидов в пересчете на один из компонентов этой группы веществ. Оптическую плотность измеряют при длине волны 15 нм, а не 363 нм - максимуме для рутина, так как при добавлении к извлечению раствора хлорида алюминия наблюдается батохромный сдвиг максимума поглощения на 52 нм.

Качественный анализ каротиноидов проводят в два этапа: 1) многократная экстракция пигментов органическим растворителем и 2) разделение методом адсорбционной хроматографии в «сухой» колонке на окиси алюминия (II степени активности I степени активности степени активности по Брокману). Содержание суммы каротиноидов определяют спектрофотометрическим методов пересчете на β-каротин в мг%. Оптическую плотность измеряют при длине волны 50 нм. В качестве раствора сравнения используют гексан. параллельно определяли оптическую плотность раствора стандартного образца бихромата калия.

Для обнаружения аскорбиновой кислоты в образцах исследуемых эфирномасличных растений используют тонкослойную хроматографию с

закрепленным слоем окиси алюминия (растворители: этилацетат - ледяная уксусная кислота, 80:20; хроматограмму высушивают и обрабатывают 0,001н водным раствором 2,6 - дихлорфенолин-дофенолята натрия. Количественное содержание аскорбиновой кислоты определяют титриметрическим методом.

Методами качественного анализа устанавливают присутствие в растениях флавоноидов (свободных агликонов и гликозидов) производных флавона, флавонола, в том числе со свободной ОН-группой у С-3 и С-7 атомов, 5-оксифлавонов и 5-оксифлавонолов, катехинов, халконов; каротиноидов, которые на колонке проявляются в виде ярко-оранжевой и желтой зоны окраски; аскорбиновой кислоты, проявляющейсяся на пластинках с закрепленным слоем сорбента в виде белого пятна на розовом фоне; эфирных масел.

Антиоксидантную активность исследуемых пряно-ароматических и растений определяют добавлением 0,2 мл экстрактов растений и 0, мл 2,25 мМ водного раствора адреналина (рН = 2,2) к 2 мл 0,15 М na-карбонатного буфера, a-карбонатного буфера, - карбонатного буфера, содержащего 2,5 мМ ЭДТА (рН = 9,0). пробы инкубируют при температуре 36°С в течение 6 мин.

Изменение оптической плотности регистрируют спектрофотометрически при длине волны 80 нм, характерной для поглощения адренохрома. показатель антиокислительной активности препаратов - процент ингибирования аутоокисления адреналина - рассчитывают по формуле:

А = (Од1 - Од2) • 100 / Од1,

где Од - изменение оптической плотности пробы в отсутствие экстракта; Од2 - изменение оптической плотности пробы в присутствии экстракта.

При расчетах антиокидантной активности также учитывают то, что экстракты имеют свою собственную окраску, которая поглощает определенную длину волны в видимой области спектра. Антиоксидантную активность оценивают по способности ингибировать аутоокисление адреналина до адренохрома in vitro и тем самым предотвращать образование активных форм кислорода. Если показатель антиоксидантной активности больше 10%, то экстракт обладает высокой активностью, а если меньше-то это слабый антиоксидант. Таким образом, выявлено, что в основном все пряно-ароматические растения проявляют высокую антиоксидантную активность (АОА), так как этот показатель больше 10%. Максимально выраженная активность - у полыни эстрагоновой (68,10%), шалфея лекарственного (53,15%), мяты перечной (52,10%).