Медицина и здравоохранение сегодня

История изобретения и принцип ПЦР

Учебные материалы / Использование молекулярно-генетических методов в методико-биологических исследованиях / История изобретения и принцип ПЦР

Страница 3

Следует обратить внимание на случаи несовпадения результатов ПЦР-анализа с результатами других исследований, например, с результатами определения антител к возбудителю методом иммуноферментного анализа (ИФА). Существует случай, когда ПЦР-анализ на хламидии дает отрицательный результат при положительном титре противохламидийного IgG. Причиной подобного расхождения могут быть: 1) "иммунологический след" - остаточный уровень IgG после ранее перенесенной хламидийной инфекции. У некоторых людей повышенный уровень антител может сохраняться многие месяцы и годы после полного выздоровления, что связано с индивидуальными особенностями иммунной системы; 2) при проведении ИФА использовалась родоспецифическая тест-система, выявляющая все виды хламидий, в том числе, респираторные - С. pneumonia, C. pecorum, C. psitaci, а при проведении ПЦР-анализа - видоспецифическая на С. trachomatis. В случае хламидийной инфекции, вызванной С. pneumonia, результат ИФА будет положительным, а результат ПЦР-анализа - отрицательным; 3) материал для ПЦР-анализа получен не из места локализации инфекционного агента. Например, при хроническом сальпингите хламидии могут быть не обнаружены в области шейки матки, а наличие инфекционного процесса будет сопровождаться выработкой антител.

Возможна и обратная ситуация, когда при положительном результате ПЦР-анализа не выявляются специфические антитела. При хронических инфекциях, которые зачастую сопровождаются иммунодепрессией, такая картина бывает не редко. Так при хроническом хламидиозе до 5% больных имеют титр противохламидийных антител, не превышающий критического уровня. При первичной инфекции следует также учитывать серонегативный период, когда, несмотря на клинические проявления заболевания антитела класса IgG в крови не выявляются. Для урогенитальных инфекций этот период может составлять до 2-х недель.

Приведенные примеры показывают, что, во-первых, метод ПЦР должен применяться клиницистами осмысленно, и врач, решивший использовать ПЦР в своей, работе должен обладать определенными знаниями об особенностях и возможностях данного метода. Во-вторых, между клиницистом и ПЦР-лабораторией должна существовать тесная обратная связь, необходимая для анализа сложных случаев и выработки правильной диагностической стратегии. В-третьих, ПЦР-анализ не является панацеей в диагностике и не заменяет существующие методы исследований, а лишь дополняет их. И главное - ПЦР не может заменить интуицию и аналитическое мышление, которыми должен обладать врач, рассчитывающий на успех (Черноусова, 2001).

На первый взгляд, использование прямых методов всегда более эффективно, так как кажется, что после проведенного исследования лабораторная служба может дать точный ответ о наличии или отсутствии патогена. Однако это невсегда так, поскольку существует эффект диссеминации многих инфекционных агентов по организму, в результате чего обнаружение патогенов в клинических образцах, которыми оперирует лаборатория, прямыми методами часто невозможно. В то же время серологическое исследование может в ряде случаев дать большое количество информации о протекающих в организме патологических процессах и их возбудителях, поскольку иммунологическая реакция является универсальным защитным механизмом.

Сочетание прямых и непрямых методов является абсолютно оправданным, когда мы говорим об использовании лабораторной диагностики при индикации урогенитальных инфекций. Комбинация этих методов в значительной степени зависит от оснащенности конкретной лаборатории, однако, в любом случае, опираться только на один метод (будь то скрининговая или финальная диагностика) нецелесообразно, так как всегда неизбежен некоторый процент ошибок. Процесс лечения же при наличии стертых клинических симптомов гораздо дороже процесса верификации агента, не говоря уже о возможности нанесения вреда организму (<http://www.pcr.ru/bibliogr/articles/article_18.htm>).

Важно отметить необходимость обследования нескольких очагов предположительной локализации инфекционного агента. Персистенция особенно латентных инфекций вирусной или бактериальной природы в организме пациентов часто приводит к невозможности моментального определения эпитопа присутствия патогена даже при наличии воспалительных симптомов. В связи с этим предпочтительно проводить серийное обследование нескольких образцов из разных отделов урогенитального тракта (Петрова, 2000).